服务案例研究

CUT&Tag案例分析

CUT&Tag（Cleavage Under Targets and Tagmentation）是研究蛋白质与DNA互作的新方法，相比于ChIP-Seq，该技术无需交联与超声打断操作，规避了抗原决定簇遮盖和样本损失问题，提高了信噪比，重复性好、实验周期短，自2019问世后便得到广泛应用。相比动物细胞，植物细胞要复杂一些，很多新技术遇到植物都要多一道门槛。CUT&Tag实验需要提前分离出高质量的细胞核，所以该技术在植物组织中的应用非常具有挑战性。

2021年4月，华中农业大学大学作物遗传改良国家重点实验室李兴旺课题组研究成果发表在Plant Biotechnology Journal上，研究首次报道了在植物中建立了单细胞核CUT&Tag (snCUT&Tag)方法，可以高通量分析单个细胞核的组蛋白修饰特征。研究将开启植物单细胞表观基因组学研究的序幕。

在本研究中，作者进一步将nCUT&Tag技术与基于微流控的单细胞标记技术（10x Single Cell ATAC）相结合，首次建立了植物单细胞核CUT&Tag (snCUT&Tag)技术。该方法首先分离水稻细胞核，随后将细胞核与抗体孵育，使抗体结合到靶蛋白上；然后与protein G-Tn5融合蛋白孵育，通过protein G与抗体的结合，将转座酶Tn5带到靶蛋白附近；加入Mg离子后，可以激活Tn5的转座活性，在靶蛋白附近原位切割DNA并在切口末端加上接头序列；Tn5切割并带上标签的细胞核加载到微流控单细胞标记芯片上，即可以标记并区分每一个单细胞的DNA信息，通过测序即可以分析成千上万个单个细胞的组蛋白修饰信息。

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