技术简介

       20 世纪70 年代，人们开始使用荧光标记的原位杂交，即FISH 技术。20 世纪80 年代，科学家成功地开发了检测单拷贝DNA 序列的FISH 技术，标志着染色体定位技术取得了重要进展。20 世纪90年代，随着人类基因组计划的进行，由于绘制高分辨人类基因组图谱的需要，FISH 技术得到了迅速的发展和广泛应用。

       FISH(fluorescence in situ hybridization) 技术是一种关键的非放射性原位杂交技术。它的基本原理是：如果被检测的染色体或DNA 纤维切片上的靶DNA 与所用的核酸探针是同源互补的，二者经变性-退火- 复性，即可形成靶DNA 与核酸探针的杂交体。该技术可以用于验证三维基因组学数据检测到的远程DNA-DNA 相互作用。

技术流程

1. 样本细胞核制备；
   

2. 探针的制备；

3. 探针标记；

4. 杂交；

5. 染色质显色；

6. 荧光显微镜检测；

7. 结果分析。

技术应用

1. FISH 技术检测位点数目及检测目标的发展^[1]；

2. FISH 技术可以检测任意2-4 个基因组位点在细胞核内是否邻近；

3. RNA FISH 技术也可以检测任意2-4 中RNA 分子在细胞内是否邻近。

技术优势

1. 荧光试剂和探针经济、安全。

2. 探针稳定，一次标记后可在两年内使用。

3. 实验周期短、能迅速得到结果、特异性好、定位准确。

4. FISH 可定位长度在1kb 的DNA 序列，其灵敏度与放射性探针相当。

5. 多色FISH 通过在同一个核中显示不同的颜色，可同时检测多种序列。

参考文献：

[1]Chrzanowska NM, Kowalewski J, Lewandowska MA. Use of Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) in Diagnosis and Tailored Therapies in Solid Tumors. Molecules. 2020 Apr 17;25(8):1864. doi: 10.3390/molecules25081864. PMID: 32316657; PMCID: PMC7221545.

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