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GRID-seq

GRID-seq,一种可以捕获全基因组范围的DNA-RNA相互作用技术。2017年,来自加州大学的付向东研究团队,研发了一种无偏差地检测全部染色质-RNA相互作用的技术:GRID-seq(Global RNA interactions with DNA by deep sequencing),相关论文发表在了Nature Biotechnology上。

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  1. 预先设计特殊的linker,一端是单链RNA,另一端是双链DNA

  2. 用DSG和甲醛固定RNA-DNA相互作用,提取细胞核

  3. 用AluI 进行酶切

  4. 加入linker,linker的RNA与要捕获的RNA连接

  5. 反转录,扩增连接的RNA

  6. 去除游离的linker

  7. linker的DNA与要捕获的DNA连接

  8. 用整合素磁珠捕获DNA

  9. 从磁珠释放ssDNA,合成dsDNA,使用MmeI,将linker上设计好的酶切位点切开

  10. 跑胶,得到两个DNA片段,85bp的是连接了RNA和DNA的linker,65bp的是只连接了RNA或者DNA的linker。

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